Javascript er nú óvirkt í vafranum þínum.Þegar javascript er óvirkt, virka sumar aðgerðir þessarar vefsíðu ekki.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez vísindadeild, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Katalóníu, Spáni * Þessir höfundar hafa nokkra innsýn í þetta verk Equal framlagsbakgrunnur: Hýalúrónsýra (HA) er náttúrulega fjölsykra sem notuð er við framleiðslu á húðfylliefnum í fagurfræðilegum tilgangi.Þar sem það hefur nokkra daga helmingunartíma í vefjum manna eru HA-undirstaða húðfylliefni efnafræðilega breytt til að lengja líf þeirra í líkamanum.Algengasta breytingin á HA-undirstaða fylliefni í verslunum er notkun 1,4-bútandíól diglýsídýleters (BDDE) sem krossbindandi efni til að krosstengja HA keðjurnar.Leifar af eða óhvarfað BDDE er talið óeitrað við <2 hluta á milljón (ppm);því verður að mæla BDDE-leifarnar í endanlegu húðfylliefninu til að tryggja öryggi sjúklinga.Efniviður og aðferðir: Þessi rannsókn lýsir greiningu og lýsingu á aukaafurð krosstengihvarfa milli BDDE og HA við basískar aðstæður með því að sameina vökvaskiljun og massagreiningu (LC-MS).Niðurstöður: Eftir mismunandi greiningar kom í ljós að basísk skilyrði og hár hiti sem notaður var til að sótthreinsa HA-BDDE hýdrógelið stuðlaði að myndun þessarar nýju aukaafurðar, „própýlen glýkól-líka“ efnasambandsins.LC-MS greining staðfesti að aukaafurðin hefur sama einsamsætumassa og BDDE, annan varðveislutíma (tR) og mismunandi UV gleypni (λ=200 nm) háttur.Ólíkt BDDE kom fram í LC-MS greiningu að við sömu mælingarskilyrði hefur þessi aukaafurð hærra greiningarhraða við 200 nm.Ályktun: Þessar niðurstöður benda til þess að ekkert epoxíð sé í byggingu þessa nýja efnasambands.Umræðan er opin til að meta hættuna á þessari nýju aukaafurð sem finnast við framleiðslu á HA-BDDE hýdrógeli (HA húðfylliefni) í viðskiptalegum tilgangi.Lykilorð: hýalúrónsýra, HA húðfylliefni, krossbundin hýalúrónsýra, BDDE, LC-MS greining, BDDE aukaafurð.
Fylliefni byggð á hýalúrónsýru (HA) eru algengustu og vinsælustu húðfylliefnin sem notuð eru í snyrtivörur.1 Þetta húðfylliefni er vatnsgel, venjulega samsett úr >95% vatni og 0,5-3% HA, sem gefur þeim gellíka uppbyggingu.2 HA er fjölsykra og aðalþátturinn í utanfrumu fylki hryggdýra.Eitt af innihaldsefnum.Það samanstendur af (1,4)-glúkúrónsýru-β (1,3)-N-asetýlglúkósamíni (GlcNAc) endurteknum tvísykrueiningum tengdum með glýkósíðtengi.Þetta tvísykrumynstur er það sama í öllum lífverum.Í samanburði við sum fylliefni sem byggja á próteinum (eins og kollagen) gerir þessi eiginleiki HA að mjög lífsamhæfri sameind.Þessi fylliefni geta sýnt amínósýruröð sérhæfni sem ónæmiskerfi sjúklingsins kann að þekkja.
Þegar það er notað sem fylliefni fyrir húð er aðaltakmörkun HA hröð velta þess í vefjum vegna nærveru sérstakrar fjölskyldu ensíma sem kallast hýalúrónídasa.Hingað til hefur nokkrum efnafræðilegum breytingum á HA uppbyggingu verið lýst til að auka helmingunartíma HA í vefjum.3 Flestar þessar breytingar reyna að draga úr aðgengi hýalúrónídasa að fjölsykrum fjölliðum með því að krosstengja HA keðjur.Þess vegna, vegna myndun brýra og samgildra samgildra tengsla milli HA-byggingarinnar og krosstengimiðilsins, framleiðir krosstengda HA-hýdrógelið meira and-ensím niðurbrotsefni en náttúrulegt HA.4-6
Hingað til eru efnafræðilegu þvertengingarefnin sem notuð eru til að framleiða krossbundið HA meðal annars metakrýlamíð, 7 hýdrazíð, 8 karbódíímíð, 9 dívínýlsúlfón, 1,4-bútandíól diglýsídýleter (BDDE) og pólý(etýlenglýkól) diglýsídýleter.10,11 BDDE er sem stendur mest notaða krossbindiefnið.Þrátt fyrir að sannað hafi verið að þessar tegundir af hýdrógelum séu öruggar í áratugi, eru þvertengingarefnin sem notuð eru hvarfefni sem geta verið frumudrepandi og í sumum tilfellum stökkbreytandi.12 Þess vegna verður afgangsinnihald þeirra í lokahýdrógelinu að vera hátt.BDDE er talið öruggt þegar afgangsstyrkurinn er minni en 2 hlutar á milljón (ppm).4
Það eru til nokkrar aðferðir til að greina styrk BDDE með lágum leifum, víxltengingargráðu og staðsetningarstöðu í HA-vatnsgellum, svo sem gasskiljun, stærðarútilokunarskiljun ásamt massagreiningu (MS), kjarnasegulómun (NMR) flúrljómunarmælingaraðferðir og Diode array coupled high performance liquid chromatography (HPLC).13-17 Þessi rannsókn lýsir greiningu og lýsingu á aukaafurð í endanlegu krosstengda HA hýdrógelinu sem framleitt er með hvarfi BDDE og HA við basísk skilyrði.HPLC og vökvaskiljun-massagreiningu (LC-MS greining).Þar sem eituráhrif þessarar aukaafurðar BDDE eru óþekkt, mælum við með því að magn leifa þess sé ákvarðað á svipaðan hátt og aðferðin sem venjulega er notuð á BDDE í lokaafurðinni.
Natríumsaltið sem fæst af HA (Shiseido Co., Ltd., Tókýó, Japan) hefur mólmassa ~1.368.000 Da (Laurent aðferð) 18 og innri seigju 2,20 m3/kg.Fyrir þvertengingarhvarfið var BDDE (≥95%) keypt frá Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, Bandaríkjunum).Fosfatjafnað saltvatn með pH 7,4 var keypt frá Sigma-Aldrich Company.Öll leysiefni, asetónítríl og vatn sem notað var í LC-MS greiningu voru keypt úr HPLC gæðaflokki.Maurasýra (98%) er keypt sem hvarfefnaflokkur.
Allar tilraunir voru gerðar á UPLC Acquity kerfi (Waters, Milford, MA, Bandaríkjunum) og tengdur við API 3000 þrefaldan fjórpóla massarófsmæli með rafúðajónunargjafa (AB SCIEX, Framingham, MA, Bandaríkjunum).
Nýmyndun krossbundinna HA-hýdrogella var hafin með því að bæta 198 mg af BDDE við 10% (w/w) natríumhýalúrónat (NaHA) lausn í nærveru 1% basa (natríumhýdroxíðs, NaOH).Lokastyrkur BDDE í hvarfblöndunni var 9,9 mg/ml (0,049 mM).Síðan var hvarfblöndunni blandað vandlega og einsleitt og leyft að halda áfram við 45°C í 4 klukkustundir.19 pH hvarfsins er haldið við ~12.
Síðan var hvarfblandan þvegin með vatni og loka HA-BDDE hýdrógelið var síað og þynnt með PBS jafnalausn til að ná HA styrk 10 til 25 mg/ml og loka pH 7,4.Til þess að dauðhreinsa framleidd þverbundin HA-hýdrógel eru öll þessi hýdrókleysuð (120°C í 20 mínútur).Hreinsaða BDDE-HA hýdrógelið er geymt við 4°C fram að greiningu.
Til að greina BDDE sem er til staðar í krosstengdu HA vörunni var 240 mg sýni vigtað og sett í miðholið (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, Bandaríkjunum; rúmmál 0,5 ml) og skilið við 10.000 rpm við stofuhita 10 mín.Alls var 20 µL af vökva sem hægt var að draga niður var safnað og greind.
Til að greina BDDE staðalinn (Sigma-Aldrich Co) við basískar aðstæður (1%, 0,1% og 0,01% NaOH), ef eftirfarandi skilyrði eru uppfyllt, er vökvasýnið 1:10, 1:100, eða allt að 1:1.000.000 Ef nauðsyn krefur, notaðu MilliQ afjónað vatn til greiningar.
Fyrir upphafsefnin sem notuð eru í krosstengingarhvarfinu (HA 2%, H2O, 1% NaOH og 0,049 mM BDDE), var 1 ml af hverju sýni sem búið var til úr þessum efnum greint með sömu greiningarskilyrðum.
Til að ákvarða sérhæfni toppanna sem birtast á jónakortinu var 10 µL af 100 ppb BDDE staðallausn (Sigma-Aldrich Co) bætt við 20 µL sýnishornið.Í þessu tilviki er lokastyrkur staðalsins í hverju sýni 37 ppb.
Fyrst skaltu útbúa BDDE stofnlausn með styrkleika 11.000 mg/L (11.000 ppm) með því að þynna 10 μL af venjulegu BDDE (Sigma-Aldrich Co) með 990 μL MilliQ vatni (þéttleiki 1,1 g/mL).Notaðu þessa lausn til að útbúa 110 µg/L (110 ppb) BDDE-lausn sem staðlaða milliþynningu.Notaðu síðan BDDE staðalþynningarefnið (110 ppb) til að útbúa staðalferilinn með því að þynna milliþynningarefnið nokkrum sinnum til að ná æskilegum styrk upp á 75, 50, 25, 10 og 1 ppb.Eins og sýnt er á mynd 1 kemur í ljós að BDDE staðalferillinn frá 1,1 til 110 ppb hefur góða línuleika (R2>0,99).Staðalferillinn var endurtekinn í fjórum sjálfstæðum tilraunum.
Mynd 1 BDDE staðalkvörðunarferill fengin með LC-MS greiningu, þar sem góð fylgni sést (R2>0,99).
Skammstafanir: BDDE, 1,4-bútandiól diglycidyl eter;LC-MS, vökvaskiljun og massagreiningu.
Til þess að bera kennsl á og magngreina BDDE staðla sem eru til staðar í krosstengdu HA og BDDE stöðlunum í grunnlausninni var LC-MS greining notuð.
Litskiljunin var náð á LUNA 2,5 µm C18(2)-HST súlu (50×2,0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, Bandaríkjunum) og haldið við stofuhita (25°C) meðan á greiningunni stóð.Hreyfanlegur fasi samanstendur af asetónítríl (leysi A) og vatni (leysi B) sem inniheldur 0,1% maurasýru.Hreyfanlegur fasi er skolaður með hallaskolun.Hallinn er sem hér segir: 0 mínútur, 2% A;1 mínúta, 2% A;6 mínútur, 98% A;7 mínútur, 98% A;7,1 mínútur, 2% A;10 mínútur, 2% A. Gangtíminn er 10 mínútur og inndælingarrúmmálið er 20 µL.Varðveislutími BDDE er um 3,48 mínútur (á bilinu 3,43 til 4,14 mínútur miðað við tilraunir).Faranlega fasanum var dælt með flæðihraða 0,25 ml/mín fyrir LC-MS greiningu.
Fyrir BDDE greiningu og magngreiningu með MS er UPLC kerfið (Waters) sameinað API 3000 þrefaldur fjórpóla massagreiningarmæli (AB SCIEX) búinn rafúðajónunargjafa og greiningin er framkvæmd í jákvæðri jónaham (ESI+).
Samkvæmt jónabrotagreiningunni sem gerð var á BDDE var brotið með hæsta styrkleikann ákvarðað vera brotið sem samsvarar 129,1 Da (mynd 6).Þess vegna, í multi-ion vöktunarham (MIM) fyrir magngreiningu, er massabreyting (massa-til-hleðsluhlutfall [m/z]) BDDE 203,3/129,1 Da.Það notar einnig fulla skönnun (FS) ham og vörujónaskönnun (PIS) ham fyrir LC-MS greiningu.
Til að sannreyna sérhæfni aðferðarinnar var núllsýni (upphaflegur hreyfanlegur fasi) greint.Ekkert merki greindist í núllsýninu með massabreytingu 203,3/129,1 Da.Varðandi endurtekningarhæfni tilraunarinnar voru 10 staðlaðar inndælingar með 55 ppb (í miðju kvörðunarferilsins) greindar, sem leiddi til afgangsstaðalfráviks (RSD) <5% (gögn ekki sýnd).
Afgangs BDDE innihald var magnmælt í átta mismunandi BDDE krosstengdum HA vatnsgellum, sem samsvara fjórum óháðum tilraunum.Eins og lýst er í hlutanum „Efni og aðferðir“ er magngreiningin metin út frá meðalgildi aðhvarfsferils BDDE staðalþynningar, sem samsvarar einstaka toppnum sem fannst við BDDE massaskiptin 203,3/129,1 Da, með varðveislu. tími 3,43 til 4,14 mínútur Ekki að bíða.Mynd 2 sýnir dæmi um litskiljun af 10 ppb BDDE viðmiðunarstaðlinum.Tafla 1 tekur saman afgangs BDDE innihald átta mismunandi vatnsgella.Gildissviðið er 1 til 2,46 ppb.Þess vegna er afgangsstyrkur BDDE í sýninu viðunandi til notkunar í mönnum (<2 ppm).
Mynd 2 Jónaskiljun af 10 ppb BDDE viðmiðunarstaðli (Sigma-Aldrich Co), MS (m/z) umskipti fengin með LC-MS greiningu á 203.30/129.10 Da (í jákvæðum MRM ham).
Skammstafanir: BDDE, 1,4-bútandiól diglycidyl eter;LC-MS, vökvaskiljun og massagreiningu;MRM, eftirlit með mörgum viðbrögðum;MS, massi;m/z, hlutfall massa og hleðslu.
Athugið: Sýni 1-8 eru autoclaved BDDE krosstengd HA hydrogel.Einnig er greint frá afgangsmagni BDDE í hýdrógelinu og hámarki BDDE varðveislutíma.Að lokum er einnig greint frá tilvist nýrra tinda með mismunandi varðveislutíma.
Skammstafanir: BDDE, 1,4-bútandiól diglycidyl eter;HA, hýalúrónsýra;MRM, eftirlit með mörgum viðbrögðum;tR, varðveislutími;LC-MS, vökvaskiljun og massagreiningu;RRT, hlutfallslegur varðveislutími.
Það kemur á óvart að greining á LC-MS jónaskiljunni sýndi að miðað við öll autoclaved krosstengd HA hydrogel sýnin sem greind voru, var auka toppur við styttri varðveislutímann 2,73 til 3,29 mínútur.Til dæmis sýnir mynd 3 jónaskiljun krosstengds HA sýnis, þar sem viðbótar toppur kemur fram við annan varðveislutíma sem er um það bil 2,71 mínútur.Hinn hlutfallslegi varðveislutími (RRT) á milli nýlega sást hámarks og hámarks frá BDDE reyndist vera 0,79 (tafla 1).Þar sem við vitum að nýlega sá toppur er minna geymdur í C18 súlunni sem notuð er í LC-MS greiningu, gæti nýi toppurinn samsvarað skautara efnasambandi en BDDE.
Mynd 3 Jónaskiljun af krosstengdu HA hýdrógelsýni fengin með LC-MS (MRM massa umbreyting 203,3/129,0 Da).
Skammstafanir: HA, hýalúrónsýra;LC-MS, vökvaskiljun og massagreiningu;MRM, eftirlit með mörgum viðbrögðum;RRT, hlutfallslegur varðveislutími;tR, varðveislutími.
Til að útiloka möguleikann á því að nýju topparnir sem sáust gætu verið aðskotaefni sem upphaflega voru til staðar í hráefninu sem notað var, voru þessi hráefni einnig greind með sömu LC-MS greiningaraðferð.Upphafsefnin sem greind eru innihalda vatn, 2% NaHA í vatni, 1% NaOH í vatni og BDDE í sama styrk og notaður var í krosstengingarhvarfinu.Jónaskiljun upphafsefnisins sem notað var sýndi hvorki efnasamband né topp og varðveislutími þess samsvarar nýja toppnum sem sést.Þessi staðreynd dregur úr þeirri hugmynd að ekki aðeins upphafsefnið gæti innihaldið efnasambönd eða efni sem gætu truflað greiningarferlið, heldur eru engin merki um hugsanlega krossmengun við aðrar rannsóknarstofuvörur.Styrkgildin sem fengust eftir LC-MS greiningu á BDDE og nýjum toppum eru sýnd í töflu 2 (sýni 1-4) og jónaskiljun á mynd 4.
Athugið: Sýni 1-4 samsvara hráefnum sem notuð eru til að framleiða autoclaved BDDE krosstengd HA hydrogel.Þessi sýni voru ekki autoclaveruð.
Skammstafanir: BDDE, 1,4-bútandiól diglycidyl eter;HA, hýalúrónsýra;LC-MS, vökvaskiljun og massagreiningu;MRM, eftirlit með mörgum viðbrögðum.
Mynd 4 samsvarar LC-MS litskiljun sýnis af hráefninu sem notað er í krosstengingarhvarfi HA og BDDE.
Athugið: Öll þessi eru mæld með sama styrk og hlutfalli sem notað er til að framkvæma krosstengingarhvarfið.Tölurnar fyrir hráefnin sem greind eru með litskiljun samsvara: (1) vatni, (2) 2% HA vatnslausn, (3) 1% NaOH vatnslausn.LC-MS greining er gerð fyrir massabreytingu 203.30/129.10 Da (í jákvæðum MRM ham).
Skammstafanir: BDDE, 1,4-bútandiól diglycidyl eter;HA, hýalúrónsýra;LC-MS, vökvaskiljun og massagreiningu;MRM, eftirlit með mörgum viðbrögðum.
Kannaðar voru aðstæður sem leiddu til myndunar nýrra tinda.Til þess að rannsaka hvernig hvarfaðstæður sem notaðar eru til að framleiða krosstengda HA-hýdrógelið hafa áhrif á hvarfvirkni BDDE krosstengiefnisins, sem leiðir til myndunar nýrra toppa (mögulegra aukaafurða), voru gerðar mismunandi mælingar.Við þessar ákvarðanir rannsökuðum við og greindum endanlega BDDE þvertengdarefnið, sem var meðhöndlað með mismunandi styrkleika af NaOH (0%, 1%, 0,1% og 0,01%) í vatnskenndum miðli, fylgt eftir með eða án autoclave.Gerlaaðferðin til að líkja eftir sömu aðstæðum er sú sama og aðferðin sem notuð er til að framleiða krosstengda HA hýdrógelið.Eins og lýst er í hlutanum „Efni og aðferðir“ var massabreyting sýnisins greind með LC-MS í 203.30/129.10 Da.BDDE og styrkur nýja toppsins er reiknaður út og niðurstöðurnar eru sýndar í töflu 3. Engir nýir toppar greindust í sýnunum sem ekki voru autoclaved, óháð tilvist NaOH í lausninni (sýni 1-4, tafla 3).Fyrir autoclaved sýni greinast nýir toppar aðeins í nærveru NaOH í lausninni og myndun toppsins virðist ráðast af NaOH styrkleika í lausninni (sýni 5-8, Tafla 3) (RRT = 0,79).Mynd 5 sýnir dæmi um jónaskiljun, sem sýnir tvö sýni sem hafa verið gerð í autoclaved í nærveru eða fjarveru NAOH.
Skammstafanir: BDDE, 1,4-bútandiól diglycidyl eter;LC-MS, vökvaskiljun og massagreiningu;MRM, eftirlit með mörgum viðbrögðum.
Athugið: Efsta litskiljunin: Sýnið var meðhöndlað með 0,1% NaOH vatnslausn og autoklavað (120°C í 20 mínútur).Botnskiljun: Sýnið var ekki meðhöndlað með NaOH, heldur autoclaved við sömu aðstæður.Massumbreytingin 203,30/129,10 Da (í jákvæðum MRM ham) var greind með LC-MS.
Skammstafanir: BDDE, 1,4-bútandiól diglycidyl eter;LC-MS, vökvaskiljun og massagreiningu;MRM, eftirlit með mörgum viðbrögðum.
Í öllum autoclaved sýnum, með eða án NaOH, var styrkur BDDE mjög lækkaður (allt að 16,6 sinnum) (sýni 5-8, Tafla 2).Minnkun á styrk BDDE getur stafað af því að við hátt hitastig getur vatn virkað sem basi (kjarnafíla) til að opna epoxíðhring BDDE til að mynda 1,2-díól efnasamband.Einsamsætu gæði þessa efnasambands eru önnur en BDDE og verða því ekki fyrir áhrifum.LC-MS greindi massabreytingu 203.30/129.10 Da.
Að lokum sýna þessar tilraunir að myndun nýrra toppa er háð tilvist BDDE, NAOH og autoclaving ferli, en hefur ekkert með HA að gera.
Nýi toppurinn sem fannst á um það bil 2,71 mínútu varðveislutíma var síðan einkenndur af LC-MS.Í þessu skyni var BDDE (9,9 mg/ml) ræktað í 1% NaOH vatnslausn og gert í autoclave.Í töflu 4 eru eiginleikar nýja toppsins bornir saman við þekkta BDDE viðmiðunartoppinn (vistunartími um það bil 3,47 mínútur).Miðað við jónabrotsgreiningu á toppunum tveimur má álykta að toppurinn með 2,72 mínútna varðveislutíma sýni sömu brot og BDDE toppurinn, en með mismunandi styrkleika (mynd 6).Fyrir toppinn sem samsvarar varðveislutímanum (PIS) upp á 2,72 mínútur, sást ákafari toppur eftir sundrun með massanum 147 Da.Við BDDE styrkinn (9,9 mg/ml) sem notaður var við þessa ákvörðun, komu einnig fram mismunandi gleypnihamar (UV, λ=200 nm) í útfjólubláa litrófinu eftir aðskilnað í litskiljun (Mynd 7).Toppurinn með 2,71 mínútu varðveislutíma er enn sýnilegur við 200 nm, en ekki er hægt að sjá BDDE toppinn í litskiljuninni við sömu aðstæður.
Tafla 4 Einkennisniðurstöður nýja toppsins með varðveislutíma um 2,71 mín og BDDE toppsins með varðveislutíma upp á 3,47 mínútur
Athugið: Til að fá þessar niðurstöður voru LC-MS og HPLC greiningar (MRM og PIS) gerðar á toppunum tveimur.Fyrir HPLC greiningu er UV uppgötvun með bylgjulengd 200 nm notuð.
Skammstafanir: BDDE, 1,4-bútandiól diglycidyl eter;HPLC, hágæða vökvaskiljun;LC-MS, vökvaskiljun og massagreiningu;MRM, eftirlit með mörgum viðbrögðum;m/z, hlutfall massa og hleðslu;PIS, vörujónaskönnun;útfjólublátt ljós, útfjólublátt ljós.
Athugið: Massabrotin eru fengin með LC-MS greiningu (PIS).Efsta litskiljun: massaróf BDDE staðalsýnisbrota.Botnskiljun: Massaróf nýja toppsins sem greinist (RRT tengt BDDE toppnum er 0,79).BDDE var unnið í 1% NaOH lausn og gert í autoclave.
Skammstafanir: BDDE, 1,4-bútandiól diglycidyl eter;LC-MS, vökvaskiljun og massagreiningu;MRM, eftirlit með mörgum viðbrögðum;PIS, framleiðslujónaskönnun;RRT, hlutfallslegur varðveislutími.
Mynd 7 Jónaskiljun af 203.30 Da forvera jóninni, og (A) nýja toppinn með varðveislutíma 2.71 mínútur og (B) UV uppgötvun BDDE viðmiðunarstaðalhámarksins við 3.46 mínútur við 200 nm.
Í öllum krosstengdu HA-hýdrógelunum sem framleidd voru kom í ljós að BDDE-afgangur eftir LC-MS magngreiningu var <2 ppm, en nýr óþekktur toppur kom fram í greiningunni.Þessi nýi toppur passar ekki við BDDE staðlaða vöruna.BDDE staðalvaran hefur einnig gengist undir sömu gæðaviðskipti (MRM viðskipti 203.30/129.10 Da) greiningu í jákvæðri MRM ham.Almennt eru aðrar greiningaraðferðir eins og litskiljun notaðar sem mörkpróf til að greina BDDE í vatnsgellum, en hámarksgreiningarmörk (LOD) eru aðeins lægri en 2 ppm.Á hinn bóginn, hingað til, hafa NMR og MS verið notuð til að einkenna gráðu krosstengingar og/eða breytinga á HA í sykureiningabrotum krossbundinna HA afurða.Tilgangur þessara aðferða hefur aldrei verið að mæla BDDE uppgötvun leifar við svo lágan styrk eins og við lýsum í þessari grein (LOD á LC-MS aðferð okkar = 10 ppb).
Pósttími: Sep-01-2021